3/1 :20221
2.2.21. ФЛУОРИМЕТРИЯ
Флуориметрия представляет собой метод, основанный на измерении интенсивности
флуоресцентного света, излучаемого испытуемым веществом по отношению к излучению
данного стандартного образца.
Методика. Испытуемый образец растворяют в растворителе или смеси растворителей,
указанных в частной монографии. Испытуемый раствор переносят в кювету или пробирку
флуориметра и освещают его возбуждающим световым лучом, приближенным к
монохромному с длинной волны, указанной в частной монографии.
Измеряют интенсивность излучаемого света под углом 90 С к возбуждающему лучу,
после его прохождения через фильтр, который пропускает преимущественно свет с
длиной волны флуоресценции. Могут быть использованы и другие типы приборов при
условии получения идентичных результатов.
Для количественного определения сначала помещают в прибор растворитель или смесь
растворителей, используемых для растворения испытуемого образца и устанавливают на
шкале прибора нулевое значение. Затем помещают стандартный раствор и регулируют
чувствительность прибора так, чтобы показание было более 50. Если вторая
корректировка была проведена с изменением ширины щели, то необходимо заново
установить нуль и снова измерить интенсивность стандартного раствора. После этого
помещают раствор с неизвестной концентрацией и считывают результат на шкале
прибора. Концентрацию вещества (с
х
) в испытуемом растворе рассчитывают по формуле:
где:
с
х
– концентрация испытуемого раствора;
с
s
– концентрация стандартного раствора;
I
x
– интенсивность света, излучаемого испытуемым раствором;
I
s
– интенсивность света, излучаемого стандартным раствором.
Если интенсивность флуоресценции не строго пропорциональна концентрации, то
измерение может быть выполнено с использованием калибровочной кривой.
В некоторых случаях измерение может быть проведено с эталоном фиксированного
стандарта (например, флуоресцирующее стекло или раствор другого флуоресцирующего
вещества). В таких случаях концентрацию испытуемого образца определяют с
использованием калибровочной кривой, предварительно построенной в тех же условиях.
