3/1 :22613

2.6.13. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИСПЫТАНИЕ НЕСТЕРИЛЬНЫХ

ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА НАЛИЧИЕ ОПРЕДЕЛЕННЫХ

МИКРООРГАНИЗМОВ

ВВЕДЕНИЕ

Испытания, описанные ниже, позволяют определять отсутствие или предельное содержание

Допускают использование альтернативных микробиологических методик, при условии

подтверждения их соответствия фармакопейным методиками и обязательным проведением

валидации.

ОБЩИЕ ПРОЦЕДУРЫ

Подготовку образцов проводят, в соответствии с указаниями, приведенными в общей

монографии 2.6.12. Если испытуемый образец обладает антимикробным действием,

необходимо его устранить или нейтрализовать, по возможности, как описано в общей

монографии 2.6.12. Если для подготовки образца используют поверхностно-активные

Должна быть установлена пригодность методики обнаруживать микроорганизмы в

присутствии испытуемого лекарственного средства. Пригодность методики необходимо

подтвердить, если были внесены изменения в методику или испытуемое лекарственное

средство, которые могут повлиять на результат испытания.

ПОДГОТОВКА ТЕСТ–ШТАММОВ

Используют стандартизированные стабильные суспензии тест-штаммов или готовят их, как

указано ниже. Число пассажей культур посевного материала не должно превышать пяти

– 3 сут.

– Staphylococcus aureus, например, ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83 или NBRC 13276;

– Pseudomonas aeruginosa, например, ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118 или NBRC 13275;

– Escherichia coli, например, ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 или NBRC 3972;

– Salmonella enterica подвид enterica серотип Typhimurium, такой как ATCC 14028 или, как

альтернатива, Salmonella enterica подвид enterica серотип Abony, например NBRC 100797,

NCTC 6017 или CIP 80.39;

от 2 °C до 8 °C.

Клостридии. Используют штаммы Clostridium sporogenes, такие как ATCC 11437 (NBRC

14293, NCIMB 12343, CIP 100651) или ATCC 19404 (NCTC 532 или CIP 79.03). Тест–штамм

температуре от 30 °С до 35 °С в течение (24 – 48) ч. В качестве альтернативы приготовлению

sporogenes для посева используют суспензию стабильных спор. Суспензия стабильных спор

может храниться при температуре от 2 °C до 8 °C в течение установленного периода.

ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ КОНТРОЛЬ

РОСТОВЫЕ И ИНГИБИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

Испытанию подвергают каждую партию готовой питательной среды, в том числе партии,

приготовленные из лиофилизированных компонентов. Проверяют подходящие свойства

Испытания ростовых свойств на жидких питательных средах: инокулируют порцию

подходящей среды небольшим количеством (не более 100 КОЕ) соответствующего

микроорганизма. Инкубируют при указанной в частной монографии температуре в течение

наименьшего периода времени, предписанного испытанием. Должен наблюдаться отчетливо

видимый рост микроорганизма, сопоставимый с ростом полученным на ранее испытанной и

одобренной серии среды.

Испытание ростовых свойств на твердых питательных средах: выполняют метод

поверхностного посева, инокулируя каждую чашку небольшим количеством (не более 100

Испытание ингибирующих свойств на жидких или твердых средах: инокулируют в

подходящую среду (не менее 100 КОЕ) соответствующий микроорганизм. Инкубируют при

указанной температуре в течение не менее максимального периода времени, предписанного

испытанием. Рост испытуемого микроорганизма не происходит.

Испытание на дифференцирующие свойства: проводят метод поверхностного посева,

микроорганизма. Инкубируют при указанной температуре в течение периода времени в

пределах диапазона, предписанного испытанием. Колонии сравнивают по внешнему виду и

характерным реакциям с колониями, полученными на ранее испытанной и одобренной серии

питательной среды.

среду. Посев каждого тест–штамма осуществляют отдельно. В инокулированном

испытуемом образце используют количество микроорганизмов, эквивалентное не более 100

КОЕ.

Испытание проводят, как описано в разделе «ИСПЫТАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ

микроорганизмы должны быть обнаружены с помощью характерных реакций, как описано в

При наличии у лекарственного средства любого антимикробного действия требуется

ИСПЫТАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ УСТОЙЧИВЫЕ К ЖЕЛЧИ

Подготовка проб и предварительная инкубация. Готовят образец, используя разведение

1:10 и содержащий не менее 1 г испытуемого образца, как описано в общей монографии

2.6.12, но используя в качестве растворителя соево–казеиновую среду, перемешивают и

инкубируют при температуре от 20 °С до 25 °С в течение времени, достаточного для

восстановления бактерий, но недостаточного для стимуляции размножения микроорганизмов

(обычно в течение 2 ч, но не более 5 ч).

отсутствии других указаний. Инкубируют при температуре от 30 °С до 35 °С в течение (24 –

48) ч. Затем пересевают на чашки с фиолетово-красным желчным агаром с глюкозой.

Инкубируют при температуре от 30 °С до 35 °С в течение (18 – 24) ч. Лекарственное

средство выдерживает испытание, если отсутствует рост колоний.

Количественное определение

Селекция и субкультура. Инокулируют бульон Мосселя с испытуемым образцом, как описано

в подразделе «Полготовка проб и предварительная инкубация» раздела «ИСПЫТАНИЕ

ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ», и/или его разведениями, содержащими соответственно 0.1

г, 0.01 г и 0.001 г (или 0.1 мл, 0.01 мл и 0.001 мл) испытуемого образца. Инкубируют при

наибольшее количество, дающее отрицательный результат. Определяют вероятное

количество бактерий по таблице 2.6.13.–2.

Таблица 2.6.13.–2 – Интерпретация результатов

ESCHERICHIA COLI

Подготовка проб и предварительная инкубация. Готовят образец, содержащий не менее 1

г испытуемого образца используя разведение 1:10 и, как описано в общей монографии 2.6.12.

Затем, переносят в количестве 10 мл (соответствует 1 г или 1 мл испытуемого образца) в

соево–казеиновый бульон, перемешивают и инкубируют при температуре от 30 °С до 35 °С в

течение (18 – 24) ч.

При испытании ородиспергируемых пленок фильтруют объем испытуемого образца,

Селекция и субкультура. Контейнер встряхивают, переносят 1 мл соево–казеинового

бульона в 100 мл бульона Мак-Конки и инкубируют при температуре от 42 °С до 44 °C в

течение (24 – 48) ч. Пересевают на чашку с агаром Мак-Конки при температуре от 30 °С до

Для подтверждения проводят испытания на идентификацию бактерий. Испытуемый образец

соответствует требованиям испытания, если отсутствуют колонии или испытания на

подлинность дают отрицательный результат.

«ОТРИЦАТЕЛЬНАЯ КОНТРОЛЬ») соево–казеинового бульона. Перемешивают и

инкубируют при температуре от 30 °С до 35 °С в течение (18 – 24) ч.

Селекция и субкультура. Переносят 0.1 мл соево–казеинового бульона в 10 мл среды

Раппопорта –Вассилиадиса для обогащения салмонелл, и инкубируют при температуре от 30

агаром. Инкубируют при температуре от 30 °С до 35 °С в течение (18–24) ч.

Интерпретация результатов. На возможное присутствие Salmonella указывает рост хорошо

развитых колоний красного цвета с черным центром или без него. Для подтверждения

Готовят образец, содержащий не менее 1 г испытуемого образца используя разведение 1:10 и,

как описано в общей монографии 2.6.12. Затем, переносят в количестве 10 мл (соответствует

1 г или 1 мл испытуемого образца) в соево–казеиновый бульон (подходящее количество

определяют в соответствии с описанием в подразделе «ПРИГОДНОСТЬ МЕТОДИКИ

ИСПЫТАНИЯ» раздела «ОТРИЦАТЕЛЬНАЯ КОНТРОЛЬ»), перемешивают и инкубируют

при температуре от 30 °С до 35 °С в течение от 18 ч до 24 ч. При испытании

трансдермальных пластырей или ородиспергируемых пленок фильтруют объем испытуемого

образца, соответствующий одному пластырю или одной пленке лекарственного средства, как

описано в подразделе «Подготовка проб и предварительная инкубация» раздела

температуре от 30 °С до 35 °С в течение (18–72) ч.

Интерпретация результатов. Рост колоний указывает на возможное присутствие P.

aeruginosa. Для подтверждения проводят испытания на идентификацию бактерий.

испытания на подлинность дают отрицательный результат.

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

Подготовка проб и предварительная инкубация. Готовят образец, содержащий не менее 1

г испытуемого образца используя разведение 1:10 и, как описано в общей монографии 2.6.12.

соответствующий одному пластырю или одной пленке лекарственного средства, описанного

в разделе 4-5-1 общей монографии 2.6.12, через стерильный мембранный фильтр и помещают

в 100 мл соево-казеинового бульона. Инкубируют при температуре от 30 °С до 35 °С в

течение (18–24) ч.

при температуре от 30 °С до 35 °С в течение (18 – 72) ч.

Интерпретация результатов. На возможное присутствие S. aureus указывает рост

золотисто-желтых колоний, окруженных желтой зоной. Для подтверждения проводят

Подготовка проб и термообработка. Готовят образец, используя разведение 1:10 в

количестве 20 мл (что соответствует 2 г или 2 мл испытуемого образца), как описано в общей

монографии 2.6.12. Делят испытуемый образец на две порции объемом не менее 10 мл. Одну

порцию нагревают при температуре 80 °С в течение 10 мин и быстро охлаждают. Вторую

порцию не нагревают.

Селекция и субкультура. Используют 10 мл или количество, соответствующее 1 г или 1 мл

испытуемого образца из обеих порций, чтобы инокулировать подходящие количества

(определенные, как описано в разделе 3-4) обогащенной среды для клостридий. Инкубируют

в анаэробных условиях при температуре от 30 °С до 35 °С в течение 48 ч. После

инкубирования делают пересев из каждой емкости на колумбийский агар и инкубируют в

образец соответствует требованиям испытания, если отсутствуют колонии или испытания на

подлинность дают отрицательный результат.

CANDIDA ALBICANS

Подготовка проб и предварительная инкубация. Испытуемый образец готовят, как

испытуемого образца), для инокуляции 100 мл смеси Сабуро с декстрозой и перемешивают.

Инкубируют при температуре от 30 °С до 35 °С в течение (3 – 5) сут.

Селекция и субультура. Пересевают на агар Сабуро с декстрозой и инкубируют при

Раздел представлен для информации

РЕКОМЕНДУЕМЫЕ РАСТВОРЫ И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

использования в испытаниях на микробиологическую чистоту. Допускается использование

Основной буферный раствор. 34 г калия дигидрофосфата Р помещают в мерную колбу

Декстроза 40.0 г