3/1:20608

2.6.8. ПИРОГЕННОСТЬ

Испытание состоит в измерении повышения температуры тела кроликов, вызванной

внутривенным введением стерильного раствора испытуемого лекарственного средства.

Выбор животных. Используют здоровых половозрелых кроликов обоего пола с массой

тела не менее 1.5 кг, получавших полноценное сбалансированное питание, не содержащее

антибиотиков. Масса тела у кроликов не должна снижаться в течение недели,

предшествующей испытанию. Кролика не следует использовать в испытании на пиро-

генность, если:

a) в течение предшествующих трех дней его использовали в испытании на пирогенность,

давшем отрицательный результат, или

b) в течение предшествующих трех недель его использовали в испытании на

пирогенность, в котором испытуемое лекарственное средство было признано не

соответствующим требованиям испытания.

Помещения для животных. Кроликов содержат индивидуально в изолированном

помещении с отсутствием раздражающих воздействий при постоянной надлежащей

температуре. За 18 ч до испытания кроликов лишают корма без ограничения воды. В

течение испытания животные не получают ни корма, ни воды. Испытание проводят в

помещении, где отсутствует риск раздражающих воздействий (акустических, оптических

и других) которые могут возбудить животных. В помещении для испытания температура

должна поддерживаться на уровне не более чем на 3 ºС, отличающемся от температуры в

месте постоянного содержания кроликов, или в котором кролики содержались в течение

не менее 18 ч до начала испытания.

Материалы. Стеклянная посуда, шприцы и иглы. Тщательно моют всю стеклянную

посуду, шприцы и иглы моют водой для инъекций и стерилизуют в сухожаровом шкафу

при температуре 250 ºС в течение 30 мин или при температуре 200 ºС в течение 1 ч.

Станки. Станки для кроликов, у которых измеряют температуру с помощью электронного

устройства, устроены таким образом, чтобы животные фиксировались лишь с помощью

свободно закрепленных на шее хомутов; остальная часть тела остается относительно

свободной так, чтобы кролики могли сидеть в обычном положении. Кроликов не

удерживают с помощью ремней или другими методами, которые могут причинить вред

животному. Животных помещают в станки не менее чем за 1 ч до первого измерения

температуры и оставляют в них в ходе всего испытания.

Термометры. Для измерения ректальной температуры у кроликов используют термометр

или электронное устройство, показывающее температуру с точностью до 0.1 ºС, вводя его

в прямую кишку кролика на глубину около 5 см. Глубина введения постоянна для каждого

кролика в течение всего испытания. При использовании электронного устройства, оно

может оставаться на месте в течение всего испытания.

Предварительное испытание. После отбора животных, за 1-3 дня до проведения

испытания лекарственного средства, тем из них, которые не использовались в течение

последних двух недель, вводят внутривенно апирогенный раствор 9 г/л натрия хлорида Р,

нагретый приблизительно до 38 ºС в количестве 10 мл на килограмм массы тела. Реги-

страцию температуры животных начинают не менее чем за 90 мин до введения и в

течение 3 ч после введения раствора. Животных, температура которых изменяется более

чем на 0.6 ºС, не используют в основном испытании.

Основное испытание. Испытание проводят с использованием группы из трех кроликов.

Подготовка и введение лекарственного средства. Испытуемую жидкость перед

введением нагревают до температуры около 38 ºС. Испытуемый образец может быть

разведен в апирогенном растворе 9 г/л натрия хлорида Р, или в другом указанном

растворителе. Раствор медленно вводят в крайнюю вену уха каждого из кроликов в

течение не более 4 мин, при отсутствии других указаний в частной монографии.

Количество вводимого испытуемого образца зависит от особенностей конкретного

лекарственного средства, представленных в частной монографии. Объем вводимого

испытуемого образца должен составлять не менее 0.5 мл и не более 10 мл на килограмм

массы тела.

Определение исходной и максимальной температуры. За «исходную температуру» каждо-

го из кроликов принимают среднее значение двух температур, зарегистрированных у

кролика с интервалом 30 мин в течение 40 мин, предшествующих введению испытуемого

образца. «Максимальная температура» каждого из кроликов ‒ самая высокая температура,

зарегистрированная у кролика в течение трех часов после введения. Температуру каждого

из кроликов регистрируют с интервалами, не превышающими 30 мин, начиная не позднее,

чем за 90 мин до введения испытуемого образца и в течение трех часов после введения. За

результат испытания принимают разность между максимальной и исходной темпе-

ратурами каждого из кроликов. При отрицательной разности температур результат

оценивают как нулевую реакцию.

Кролики, показывающих изменение температуры более чем на 0.2 °С между двумя

последовательными измерениями при определении исходной температуры, исключают из

испытания. В испытании используют кроликов, исходная температура которых

отличается друг от друга не более чем на 1 ºС. Всех кроликов, исходная температура

которых выше 39.8 ºС или ниже 38.0 ºС, исключают из испытания.

Интерпретация результатов. После проведения испытания на группе из трех кроликов,

при необходимости его повторяют на других группах из трех кроликов (не более четырех

групп), в зависимости от полученных результатов. Если сумма результатов, полученных в

первой группе, не превышает значение, указанное во второй колонке таблицы 2.6.8.-1,

считают, что лекарственное средство выдерживает испытание.

Если сумма результатов превышает значение, указанное во второй колонке таблицы, но не

превышает значение, указанное в третьей колонке таблицы, испытание повторяют, как

указано выше. Если сумма результатов превышает значение, указанное в третьей колонке

таблицы, считают, что лекарственное средство не выдерживает испытание.

Таблица 2.6.8.-1

Количество

кроликов

Лекарственное средство

выдерживает испытание, если

сумма результатов

не превышает

Лекарственное средство

не выдерживает испытание,

если сумма результатов

превышает

1.15 ºС

2.65 ºС

2.80 ºС

4.30 ºС

4.45 ºС

5.95 ºС

6.60 ºС

Кроликов, используемых в испытании на пирогенность, исключают из всех испытаний в

случае, если среднее повышение температуры превысило 1.2 ºС.

Испытания необходимо проводить таким образом, чтобы использовать минимальное

количество животных и причинять наименьшую боль, страдание или долговременный

вред. При возможности и после валидации конкретного лекарственного средства

испытание на пирогенность заменяют испытанием на активацию моноцитов (2.6.30).