3/1:20702

2.7.2. АНТИБИОТИКТЕРДІ МИКРОБИОЛОГИЯЛЫҚ ӘДІСПЕН САНДЫҚ

АНЫҚТАУ

Антибиотиктердің белсенділігі сыналатын үлгінің және белгілі бір концентрациядағы

стандартты үлгінің әсерінен сезімтал микроорганизмдер ӛсуінің тежелу дәрежесін

салыстыру арқылы анықталады.

Сандық анықтау үшін қолданылатын стандартты үлгілер белсенділігі халықаралық

стандартқа немесе халықаралық стандартты препаратқа қатысты дәл белгіленген заттар

болып табылады.

Сандық анықтауды белсенділікті есептеу негізделген математикалық модельдің

дұрыстығын тексеруге мүмкіндік беретін әдіспен жүзеге асырады. Егер параллель

түзулердің моделі таңдалса, сыналатын үлгі мен стандартты үлгі үшін белсенділіктің

(немесе түрлендірілген жауаптың) дозаға логарифмдік тәуелділік сызықтары параллель

болуы керек; олар есептеулерде қолданылатын дозалар ауқымында тәуелді болуы тиіс.

Осы шарттардың орындалуы белгіленген маңыздылық деңгейінде сенімділікті анықтау

әдістерімен расталуы керек, әдетте P = 0.05. Басқа математикалық әдістерді де

пайдалануға болады, мысалы, нәтижелердің статистикалық дұрыстығын растаған

жағдайда бұрыштық коэффициенттер әдісін қолдану.

Жеке монографияда басқа нұсқаулар болмаған кезде сандық анықтаудың сенімділік

аралықтары (Р = 0.95) болжамды белсенділіктің кемінде 95% - ды құрауы және 105% - дан

аспауы тиіс.

Анықтауды А әдісімен немесе В әдісімен жүргізеді.

А. ДИФФУЗИЯ ӘДІСІ

Сынауға жарамды қоректік ортаны балқытады және оған тиісті, мысалы, вегетативті

түрлер үшін 45 °C-ден 50 °C-ге дейінгі температурада антибиотиктің сыналатын үлгісіне

сезімтал микроорганизмдер суспензиясының белгілі бір мӛлшерін енгізеді.

Микроорганизмдердің енгізілген суспензиясының мӛлшері сынау кезінде қолданылатын

антибиотиктің барлық концентрацияларында оның қолайлы диаметрдің ӛсуін тежеу

аумақтарының айқындылығын қамтамасыз етуге тиіс. Микроорганизмдердің тест-

штаммдарының инокуляциясынан кейін бірден қоректік ортаны қалыңдығы 2 мм-ден 5

мм-ге дейін біртекті қабат пайда болғанша Петри тостағандарына немесе үлкен

тікбұрышты тостағандарға құяды. Сонымен қатар, қоректік ортаны екі қабат етіп құюға

рұқсат етіледі, бмұл ретте тек жоғарғы қабатты инокульдейді.

Тостағандарды қолданар алдында микроорганизмдердің ӛсуіне жол бермейтіндей етіп

сақтайды, сонымен қатар пайдалану кезінде қоректік ортаның беткейі құрғақ болуы керек.

2.7.2.−1 кестеде ұсынылған еріткіш пен буферлік ерітіндіні пайдалана отырып,

концентрациясы белгілі және болжамды түрде белсенділігі бірдей антибиотиктің

стандартты үлгісі мен сыналатын үлгінің ерітінділерін дайындайды. Ерітінділерді

қоршаған ортаның беткейіне, мысалы, фарфордан, тот баспайтын болаттан немесе басқа

қолайлы материалдан жасалған стерильді цилиндрлерге немесе агар қабатыныда

дайындалған ойықшаларға жағады. Әрбір тостағаунның барлық цилиндрлеріне немесе

ойықшаларына ерітінділердің тең кӛлемін енгізеді. Балама ретінде сай келетін сападағы

стерильді сүзгі қағаз дискілерін пайдалануға болады; дискіледі стандартты үлгідегі

ерітінділермен және антибиотиктің сыналатын үлгі ерітінділерімен сіңдіріп, агар

беткейіне орналастырады.

Сандық анықтау әдістемесінің жарамдылығын бағалау үшін стандартты үлгінің кемінде

үш дозасын және болжамды бірдей белсенділігі бар антибиотиктің сыналатын үлгісінің

үш тиісті дозасын қолданады. Пайдаланылатын дозалардың геометриялық прогрессияны

құрағаны дұрыс. Күнделікті сынаулар кезінде жүйенің сызықтығы үш еселенген

анықтаулардың жеткілікті үлкен санында расталған кезде және уәкілетті органның

келісімі бойынша екі еселенген анықтау мүмкін болады. Алайда, барлық даулы

жағдайларда жоғарыда сипатталған анықтауды үш мән бойынша қолдану керек.

Әрбір Петри тостағанында немесе тікбұрышты тостағанда ерітінділерді алтыдан асатын

ерітіндіні орналастыруға болмайтын, шағын Петри тостағандарынан басқа сай келетін

статистикалық схемаға сәйкес орналастырады. Антибиотиктің сыналатын үлгісі мен

стандартты үлгінің ерітінділерін анағұрлым концентрацияланған ерітінділердің ӛзара

әрекеттесуін жоққа шығаратындай етіп кезектестіреді.

Тостағандарды қолайлы температурада шамамен 18 сағат бойы инкубациялайды. Сынауда

қолданылатын ерітінділерді енгізу мен регрессия сызығын нақтылау арасындағы уақыт

айырмашылығының әсерін азайту үшін бӛлме температурасында немесе қажет болған

жағдайда, 4 °C температурада белгілі бір әдетте 1 сағаттан 4 сағатқа дейінгі уақыт

аралығында алдын ала диффузияны қолдану ұсынылады.

Ӛсуді тежеудің дӛңгелек аймақтарының диаметрлерін кемінде 0.1 мм дәлдікпен немесе

олардың аудандарын тиісті дәлдікпен ӛлшейді және тиісті статистикалық әдістерді

қолдана отырып, белсенділікті есептейді.

Қажетті дәлдікті қамтамасыз ету үшін бір доза үшін қатарлас сынаулардың жеткілікті

саны болуы керек. Қажетті дәлдікке қол жеткізу және антибиотиктің сыналатын үлгісінің

белсенділігі рұқсат етілген минималды белсенділіктен тӛмен емес екенін растау үшін

нәтижелері статистикалық ӛңдеу кезінде біріктірілетін бірнеше анықтаулар жасалуы

мүмкін.

B. ТУРБИДИМЕТРИЯЛЫҚ ӘДІС

Тиісті қоректік ортаға антибиотиктің сыналатын үлгісіне сезімталдығы бар таңдалған

микроорганизмнің суспензиясын енгізеді, бұл анықтау жағдайында микроорганизмнің

ӛсуіне жеткілікті күшті тежелуді қамтамасыз етеді. Ұзақтығы шамамен 4 сағат болатын

инкубациялық кезеңнен кейін оңай ӛлшенетін опалесценцияны алу үшін суспензияның

белгілі бір мӛлшерін қолданады.

Микроорганизмдер инокуляциясынан кейін қоректік ортаны дереу қолданады.

2.7.2.-2-кестеде кӛрсетілген еріткіш пен буферлік ерітіндіні қолдана отырып, белсенділігі

бірдей белгілі концентрациясы бар стандартты үлгі мен антибиотиктің сыналатын

үлгісінің ерітінділерін дайындайды.

Сандық анықтау әдістемесінің жарамдылығын растау үшін стандартты үлгінің кемінде үш

дозасын және болжамды тең белсенділігі бар антибиотиктің сыналатын үлгісінің үш

дозасын қолданады.

Қолданылатын дозалар геометриялық прогрессияны құраған жӛн. Қажетті сызықтықты

алу үшін стандартты үлгіге және антибиотиктің сыналатын үлгісіне сәйкес дозаларды

қолдана отырып, үлкен мӛлшерден қатарынан үш дозаны таңдау қажет болуы мүмкін.

Ерітінділердің әрбіреуінің тең кӛлемін бірдей пробиркаларға енгізеді және әр пробиркаға

инокульденген ортаның тең кӛлемін қосады (мысалы, 1 мл ерітінді және 9 мл орта).

Тиротрицинді сандық анықтау кезінде 0.1 мл ерітінді мен 9.9 мл инокульденген ортаны

қосады.

Антибиотик қосылмаған инокульденген ортасы бар екі бақылау пробиркасын

дайындайды. Олардың біріне бірден 0.5 мл формальдегид Р қосады.Бұл пробиркаларды

ӛсуді ӛлшеу үшін қолданылатын оптикалық құралды теңшеу үшін қолданады.

Барлық пробиркаларды латын шаршысы немесе кездейсоқ блок схемасы бойынша

кездейсоқ ретпен орналастырады және барлық пробиркалардың температурасын қажетті

инкубациялық температураға тез жеткізуге мүмкіндік беретін, су моншасына немесе басқа

қолайлы құрылғыға орналастырады және температураның біркелкілігін әрі инкубацияның

тең уақытын қамтамасыз ете отырып, оларды 3 сағаттан 4 сағатқа дейін осы

температурада ұстайды.

Инкубация кезеңі аяқталғаннан кейін әр пробиркаға 0.5 формальдегидтен Р қосу немесе

жылумен ӛңдеу арқылы микроорганизмдердің ӛсуін тоқтатады. Тиісті оптикалық

құралдың кӛмегімен опалесценция үшінші маңызды санға дейін ӛлшенеді. Сонымен

қатар, барлық пробиркалар үшін бірдей инкубациялық кезең аяқталғаннан кейін әр

пробирканың ішіндегі опалесценцияны ӛлшеуге мүмкіндік беретін әдісті қолдануға рұқсат

етіледі.

Тиісті статистикалық әдістерді қолдана отырып, белсенділікті есептейді.

Түрлендірулердің сызықтығын немесе реакцияның дозаға ӛзгермейтін тәуелділігін

кӛбінесе шектеулі аралықта ғана алады. Белсенділікті есептеу кезінде тек аралықты

қолданған жӛн, оған сызықтықты тексеру үшін қажет кем дегенде үш бірізді доза кіреді.

Әдеттегі сынаулар кезінде уәкілетті органмен келісе отырып, сызықтық үш мәнді

пайдалана отырып, эксперименттердің жеткілікті санымен расталған жағдайда анықтауды

екі мән бойынша жүргізуге болады. Алайда, барлық даулы жағдайларда жоғарыда

сипатталған анықтауды үш мән бойынша қолдану керек.

2.7.2-1-кесте. Диффузия әдісімен сандық анықтау

Антибиотик

Стандартты үлгі

Негізгі ерітіндіні

дайындауға арналған

еріткіш

Буферлік

ерітінді (рН)

Орта және рН

соңғы мәні

(±0.1 рН бірл.)

Инкубация

температурас

(°С)

Микроорганизм

Амфотерицин В

Микробиологиялық

сандық анықтау үшін

амфотерицин В ҚР

МФ СҮ (EP CRS)

Диметилсульфоксид Р

10.5 (0.2 М)

Saccharomyces

cerevisiae

АТСС 9763

IR 1432-83

F-рН 6.1

35 − 37

Бацитриацин-

мырыш

Бацитриацин-мырыш

ҚР МФ СҮ (ЕР CRS)

0.01 М хлорсутек

қышқылы

7.0 (0.05 M)

Micrococcus luteus

NCTC 7743

CIP 53.160

ATCC 10240

A − pH 7.0

35 − 39

Блеомицин

сульфаты

Блеомицин сульфаты

ҚР МФ СҮ (ЕР CRS) а

Су Р

6.8 (0.1 M)

Mycobacterium

smegmatis

ATCC 607

G − pH 7.0

35 − 37

Натрий

колистиметаты

Натрий

колистиметаты ҚР

МФ СҮ (ЕР CRS)

Су Р

6.0 (0.05 M)

Escherichia coli

NCIMB 8879

CIP 54.127

ATCC 10536

B − pH 7.3

35 − 39

Колистин

сульфаты

Микробиологиялық

сандық анықтау үшін

колистин

Су Р

6.0 (0.05 M)

Bordetella

bronchiseptica

NCTC 8344

B − pH 7.3

35 − 39

Water R

pH 6.0

(0.05 M)

сульфатының ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

CIP 53.157

ATCC 4617

Escherichia coli

NCIMB 8879

CIP 54.127

ATCC 10536

B − pH 7.3

35 − 39

Фрамицетин

сульфаты

Фрамицетин

сульфаты ҚР МФ СҮ

(ЕР CRS)

Су Р

8.0 (0.05 M)

Bacillus subtilis

NCTC 10400

CIP 52.62

ATCC 6633

Staphylococcus

epidermidis

NCIMB 8853

CIP 68.21

ATCC 12228

E-pH 7.9

35 − 39

Гентамицин

сульфаты

Гентамицин

сульфаты ҚР МФ СҮ

(ЕР CRS)

Су Р

8.0 (0.05 М)

Bacillus pumilus

CIP 76.18

NCTC 8241

Staphylococcus

epidermidis

NCIMB 8853

CIP 68.21

ATCC 12228

A − pH 7.9

35 − 39

Джозамицин

Джозамицин ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Метанол Р

(монографияны

5.6

Bacillus subtilis

CIP 52.62

ATCC 6633

A − pH 6.6

35 − 37

қараңыз)

NCTC 10400

Джозамицин

пропионаты

Джозамицин

пропионаты ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Метанол Р

(монографияны

қараңыз)

5.6

Bacillus subtilis

CIP 52.62

ATCC 6633

NCTC 10400

A − pH 6.6

35 − 37

Канамицин

моносульфаты

Канамицин

моносульфаты ҚР

МФ СҮ (EP CRS)

Су Р

8.0 (0.05 M)

Bacillus subtilis

NCTC 10400

CIP 52.62

ATCC 6633

Staphylococcus

aureus

NCTC 7447

CIP 53.156

ATCC 6538 P

A − pH 7.9

30 − 37

35 − 39

Канамицин

гидросульфаты

Неомицин

сульфаты

Микробиологиялық

сандық анықтау үшін

неомицин сульфаты

ҚР МФ СҮ (EP CRS)

Су Р

8.0 (0.05 M)

Bacillus pumilus

NCTC 8241

CIP 76.18

Bacillus subtilis

NCTC 10400

CIP 52.62

ATCC 6633

E − pH 7.9

30 − 37

Нетилмицин

сульфаты

Нетилмицин

сульфаты ҚР МФ СҮ

(ЕР CRS)

Су Р

8.0 ± 0.1

Staphylococcus

aureus

ATCC 6538 P

CIP 53.156

A − pH 7.9

32 − 35

Нистатин

Нистатин ҚР МФ СҮ

(ЕР CRS)

Диметилформамид Р

6.0 (0.05 M)

құрамында 5 %

(көл./көл.)

диметилформа

мид Р

Candida tropicalis

CIP 1433-83

NCYC 1393

Saccharomyces

cerevisiae

NCYC 87

CIP 1432-83

ATCC 9763

F − pH 6.0

30 − 37

30 − 32

Полимиксин Б

сульфат

Микробиологиялық

сандық анықтау үшін

Полимиксин Б

сульфат ҚР МФ СҮ

(EP CRS)

Су Р

6.0 (0.05 M)

Bordetella

bronchiseptica

NCTC 8344

CIP 53.157

ATCC 4617

B − pH 7.3

35 − 39

Натрий

рифамицині

Натрий рифамицині

ҚР МФ СҮ (ЕР CRS)

Метанол Р

7.0 (0.05 M)

Micrococcus luteus

NCTC 8340

CIP 53.45

ATCC 9341

A − pH 6.6

35 − 39

Спирамицин

Спирамицин ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Метанол Р

8.0 (0.05 M)

Bacillus subtilis

NCTC 10400,

CIP 52.62

ATCC 6633

A − pH 7.9

30 − 32

Стрептомицин

сульфаты

Стрептомицин

сульфаты ҚР МФ СҮ

(ЕР CRS)

Су Р

8.0 (0.05 M)

Bacillus subtilis

NCTC 8236

CIP 1.83

Bacillus subtilis

A − pH 7.9

30 − 37

NCTC 10400

CIP 52.62

ATCC 6633

30 − 37

Тейкопланин

Тейкопланин ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

6.0 (0.05 M)

Bacillus subtilis

NCTC 10400

CIP 52.62

ATCC 6633

H − pH 7.8 − 8.0

35 − 37

Ветеринариялық

пайдалануға

арналған тилозин

Ветеринариялық

пайдалануға

арналған тилозин

фосфаты

Ветеринариялық

пайдалануға

арналған тилозин

тартраты

Тилозин ҚР МФ СҮ

(EP CRS)

рН 7.0 Р болатын

фосфатты буферлік

ерітіндідегі 2.5%

(кӛл./кӛл.) метанол Р

рН 8.0 Р

болатын 0.1

фосфатты

буферлік

ерітінді ‒

метанол Р

(40:60)

Micrococcus luteus

NCTC 8340

CIP 53.45

ATCC 9341

A − pH 8.0

32 − 35

Ванкомицин

гидрохлориді

Ванкомицин

гидрохлориді ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Су Р

8.0

Bacillus subtilis

NCTC 10400

CIP 52.62

ATCC 6633

A − pH 8.0

37 − 39

2.7.2-2– кесте. Турбидиметриялық анықтау

Антибиотик

Стандартты үлгі

Негізгі ерітіндіні

дайындауға арналған

еріткіш

Буферлік

ерітінді (рН)

Орта және рН

соңғы мәні

(±0.1 рН бірл.)

Инкубация

температурас

(°С)

Микроорганизм

Натрий

колистиметаты

Натрий

колистиметаты ҚР

МФ СҮ (ЕР CRS)

Су Р

7.0

Escherichia coli

NCIMB 8666

CIP 2.83

ATCC 9367

С − pH 7.0

35 − 37

Колистин

сульфаты

Микробиологиялық

сандық анықтау үшін

колистин

сульфатының ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Су Р

7.0

Escherichia coli

NCIMB 8666

CIP 2.83

ATCC 9637

С − pH 7.0

35 − 37

Water R

pH 6.0

(0.05 M)

Фрамицетин

сульфаты

Фрамицетин

сульфаты ҚР МФ СҮ

(ЕР CRS)

Су Р

8.0

Staphylococcus

aureus

NCIMB 7447

CIP 53.156

ATCC 6538 Р

С− pH 7.0

35 − 37

Гентамицин

сульфаты

Гентамицин

сульфаты ҚР МФ СҮ

(ЕР CRS)

Су Р

7.0

Staphylococcus

aureus

NCIMB 7447

CIP 53.156

ATCC 6538 Р

С − pH 7.0

35 − 37

Грамицидин

Грамицидин ҚР МФ

Метанол Р

7.0 *

Enterococcus hirae

CIP 58.55

С − pH 7.0

СҮ (EP CRS)

ATCC 10541

Staphylococcus

aureus

ATCC 6538 Р

35 − 37

* Сұйылту кезінде материалға адсорбцияны болдырмау үшін детергентті қосу қажет болуы мүмкін, мысалы, 0.1 мг/мл 80

полисорбат Р

Джозамицин

Джозамицин ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Метанол Р

(монографияны

қараңыз)

5.6

Staphylococcus

aureus

CIP 53.156

ATCC 6538 P

NCTC 7447

С − pH 8.0

35 − 37

Джозамицин

пропионаты

Джозамицин

пропионаты ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Метанол Р

(монографияны

қараңыз)

5.6

Staphylococcus

aureus

CIP 53.156

ATCC 6538

NCTC 7447

С − pH 8.0

35 − 37

Канамицин

моносульфаты

Канамицин

гидросульфаты

Канамицин

моносульфаты ҚР

МФ СҮ (EP CRS)

Су Р

8.0

Staphylococcus

aureus

NCTC 7447

CIP 53.156

ATCC 6538 P

С − pH 7.0

35 − 37

Неомицин

сульфаты

Микробиологиялық

сандық анықтау үшін

неомицин

сульфатының ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Су Р

8.0

Staphylococcus

aureus

NCTC 7447

CIP 53.156

ATCC 6538 P

С − pH 7.0

35 − 37

Натрий

рифамицині

Натрий рифамицині

ҚР МФ СҮ (ЕР CRS)

Метанол Р

7.0

Escherichia coli

NCIMB 8879

CIP 54.127

ATCC 10536

С − pH 7.0

35 − 37

Спирамицин

Спирамицин ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Метанол Р

7.0

Staphylococcus

aureus

NCTC 7447

CIP 53.156

ATCC 6538 P

С − pH 7.0

35 − 37

Стрептомицин

сульфаты

Стрептомицин

сульфаты ҚР МФ СҮ

(ЕР CRS)

Су Р

8.0

Klebsiella

pneumoniae

NCTC 7427

CIP 53.153

ATCC 10031

С − pH 7.0

35 − 37

Ветеринариялық

пайдалануға

арналған тилозин

Ветеринариялық

пайдалануға

арналған тилозин

тартраты

Тилозин ҚР МФ СҮ

(EP CRS)

рН 7.0 Р болатын

фосфатты буферлік

ерітіндідегі 2.5%

(кӛл./кӛл.) метанол Р

7.0

Staphylococcus

aureus

NCTC 6571

ATCC 9144

CIP 53.154

С − pH 7.0

Тиротрицин

Грамицидин ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Спирт Р

Enterococcus hirae

ATCC 10541

С − pH 7.0

Ванкомицин

гидрохлориді

Ванкомицин

гидрохлориді ҚР МФ

СҮ (EP CRS)

Су Р

8.0

Staphylococcus

aureus

CIP 53.156

ATCC 6538 P

С − pH 7.0

37 − 39

Әр анықтауда қажетті дәлдікті алу үшін жеткілікті қайталанулар санын қолданады.

Анықтауды қайта жасауға болады және нәтижелерді статистикалық ӛңдеу кезінде қажетті

дәлдікті алу үшін және антибиотиктің сыналатын үлігісінің белсенділігі ең тӛменгі

талаптардан тӛмен емес екенін растау үшін біріктіруге болады.

Келесі бөлім ақпарат үшін берілген

ҰСЫНЫЛАТЫН МИКРООРГАНИЗМДЕР

Бұл бӛлімде ұсынылған микроорганизмдер және оларды қолдану шарттары сипатталған.

Басқа микроорганизмдерді антибиотиктің сыналатын үлгісіне сезімталдығы дәлелденген

жағдайда қолдануға болады және оларды қолайлы ортада және қолайлы температура мен

рН мәндерінде қолдануға болады. Қолданылатын ерітінділердің концентрациясы сынау

жағдайында доза логарифмі мен реакция арасындағы дозаға тәуелділіктің болуын

қамтамасыз ететіндей етіп таңдалуы керек.

Инокулят дайындау. Bacillus cereus var. mycoides; Bacillus subtilis; Bacillus pumilus.

Себінді материал ретінде қолданылатын микроорганизм спораларының суспензиясын

келесідей дайындайды:

Микроорганизмдер қолайлы ортаның беткейінде 7 күн бойы 35 ºС-ден 37 ºС-ге дейінгі

температурада ӛсіріледі, оған 0.001 г/л концентрациясында марганец (II) Р сульфатын Р

қосады. Негізінен споралардан тұратын ӛсірілген ӛсіріндіні стерильді сумен Р

шаяды.Суспензияны 70 ºС температурада 30 минут бойы қыздырады және споралардың

қолайлы концентрациясын алу үшін әдетте миллилитрде 10 × 10

-дан 100 × 10

-ға дейін

сұйылтады. Споралардың суспензиясын ұзақ уақыт бойы 4 °C-ден аспайтын

температурада сақтауға болады.

Баламалы әдіс ретінде споралардың суспензиясын микроорганизмдерді С ортасында 26 °С

температурада 4 тәуліктен 6 күнге дейін ӛсіру арқылы, асептикалық жағдайларда 0.001 г/л

концентрациясын алу үшін жеткілікті мӛлшерде марганец(II) сульфатын Р кейіннен қосу

және 48 сағат бойы кейінгі инкубациялау арқылы дайындауға болады. Спора түзілуді

(шамамен 80 %) растау үшін суспензияны микроскопиялық түрде зерттейді және

центрифугалайды. Тұнбаны стерильді суда Р қайта суспензиялайды, миллилитрде 10 ×

-дан 100 × 10

-ға дейінгі споралардың концентрациясын алады, содан кейін 70 ºС

температурада 30 минут бойы қыздырады. Суспензияны 4 ºС-ден аспайтын температурада

сақтайды.

Bordetella bronchiseptica. Тест-микроорганизмді В ортасында 35 ºС-ден 37 ºС-ге дейінгі

температурада 16 сағттан 18 сағатқа дейін ӛсіреді. Ӛсірілген ӛсіріндіні стерильді сумен Р

шаяды және қажетті бұлыңғырлану дәрежесіне дейін сұйылтады.

Staphylococcus aureus; Klebsiella pneumoniae; Escherichia

coli; Micrococcus luteus; Staphylococcus epidermidis. Себінді материалды B. Bronchiseptica

үшін жоғарыда сипатталған әдіс бойынша дайындайды, бірақ турбидиметриялық

анықтауда әдіске байланысты дозаға реакцияның қанағаттанарлық тәуелділігін немесе

диффузиялық сандық анықтау кезінде қолайлы диаметрлі ӛсуді тежейтін нақты аймақтар

беретін мәнге дейін бұлыңғырлану дәрежесін жеткізу мен А ортасын пайдалану арқылы

дайындайды.

Saccharomyces cerevisiae; Candida tropicalis. Тест-микроорганизмдерді 24 сағат бойы 35

ºС-ден 37 ºС-ге дейінгі температурада F ортасында ӛсіреді. Ӛсірілген ӛсіріндіні 9 г/л

натрий хлориді Р стерильді ерітіндісімен жуады және сол ерітіндімен қажетті

бұлыңғырлану дәрежесіне дейін сұйылтады.

Буферлік ерітінділер. 5.8-ден 8.0-ге дейінгі аралықта рН мәні бар буферлік ерітінділерді

50.0 мл 0.2 М калий дигидрофосфаты Р ерітіндісін 2.7.2.-3-кестеде кӛрсетілген 0.2 М

натрий гидроксиді ерітіндісі кӛлемімен араластыру арқылы дайындайды; жаңа

дайындалған дистилденген сумен Р 200.0 мл кӛлеміне дейін сұйылтады.

2.7.2.-3-кесте

рН

0.2 М натрий гидроксиді ерітіндісі (мл)

5.8

3.72

6.0

5.70

6.2

8.60

6.4

12.60

6.6

17.80

6.8

23.65

7.0

29.63

7.2

35.00

7.4

39.50

7.8

42.80

8.0

46.80

Бұл буферлік ерітінділерді блеомицин сульфаты мен амфотерицин В қоспағанда, 2.7.2.-1-

кестеде ұсынылған барлық микробиологиялық сынаулар үшін қолданады.

Блеомицин сульфатына арналған рН 6.8 болатын буферлік ерітіндіні 6.4 г калий

дигидрофосфаты Р мен 18.9 г натрий гидрофосфатын Р суда Р ерітк арқылы

дайындайды және сумен Р 1000 мл кӛлеміне дейін жеткізеді.

Амфотерицин В үшін рН 10.5 болатын 0.2 М фосфатты буферлік ерітіндіні пайдаланады,

оны 35 г калий гидрофосфатын Р 900 мл суда Р еріту және 20 мл 1 М натрий гидроксидін

қосу арқылы дайындайды, бұдан әрі 1000.0 мл кӛлемге дейін сумен Р жеткізеді.

Қоректік орталар. Келесі қоректік орталарды пайдалануға болады.

А қоректік ортасы

Пептон

6 г

Панкреатиндік казеин гидролизаты

4 г

Ет экстрактісі

1.5 г

Ашытқы экстрактісі

3 г

Глюкоза моногидраты

1 г

Агар

15 г

Су

1000 мл дейін

В қоректік ортасы

Панкреатиндік казеин гидролизаты

17 г

Соя бұршақтарының папаин гидролизаты

3 г

Натрий хлориді

5 г

Калий гидрофосфаты

2.5 г

Глюкоза моногидраты

2.5 г

Полисорбат 80

10 г

Су

1000 мл дейін

Полисорбат 80 қалған ингредиенттердің ыстық ерітіндісіне қайнағаннан кейін, кӛлемді

жеткізер алдында қосады.

С қоректік ортасы

Пептон

6 г

Ет экстрактісі

1.5 г

Ашытқы экстрактісі

3 г

Натрий хлориді

3.5 г

Глюкоза моногидраты

1 г

Калий гидрофосфаты

3.68 г

Калий дигидрофосфаты

1.32 г

Су

1000 мл дейін

D қоректік ортасы

Жүрек экстрактісі

1.5 г

Ашытқы экстрактісі

1.5 г

Казеин-пептон

5 г

Глюкоза моногидраты

1 г

Натрий хлориді

3.5 г

Калий гидрофосфаты

3.68 г

Калий дигидрофосфаты

1.32 г

Калий нитраты

2 г

Су

1000 мл дейін

Е қоректік ортасы

Пептон

5 г

Ет экстрактісі

3 г

Натрий гидрофосфаты, 12H

26.9 г

Натрий гидрофосфатын ортаны стерилизациялағаннан кейін стерильді ерітінді ретінде

қосады.

F қоректік ортасы

Пептон

9.4 г

Ашытқы экстрактісі

4.7 г

Ет экстрактісі

2.4 г

Натрий хлориді

30.0 г

Глюкоза моногидраты

10.0 г

Агар

23.5 г

Су

1000 мл дейін

G қоректік ортасы

Глицерин

10 г

Пептон

10 г

Ет экстрактісі

10 г

Натрий хлориді

3 г

Агар

15 г

Су

1000 мл дейін

стерилизациядан кейін рН мәні 7.0 ± 0.1

Н қоректік ортасы

Пептон

5.0 г

Агар

15.0 г

Агар

10 г

Су

1000 мл дейін

Ет экстрактісі (ұнтақ)

3.0 г

Су

1000 мл дейін

0.1 М натрий гидроксиді ерітіндісінің кӛмегімен 7.8-ден 8.0-ге дейін рН мәнін орнатады.